Fast and cost-effective protocol to produce Paracoccidioides spp. antigens

Introduction. The existing methods for Paracoccidioides spp. antigen production are problematic in terms of standardization, specificity, stability, repeatability, and reproducibility. Objective. To optimize the methodology for Paracoccidioides spp. antigen production and evaluate its applicability in paracoccidioidomycosis immunodiagnosis. Materials and methods. The antigens were obtained from Paracoccidioides lutzii isolates (01, 66, and 8334), Paracoccidioides brasiliensis sensu stricto (113), and Paracoccidioides restripiensis (B-339). These fungi were grown at 36 °C ± 1 °C, on modified Fava-Netto agar, according to Freitas et al. (2018). Paracoccidioides lutzii antigens were obtained after 5, 10, and 20 days of culture, whereas P. brasiliensis and P. restripiensis antigens were obtained after 10 days. Antigens were evaluated in natura, 10 and 20 times concentrated. Antigenic capacity was evaluated using a double immunodiffusion assay against serum samples from patients with paracoccidioidomycosis, histoplasmosis, and aspergillosis, and random blood donors. Results. Cross-reactivity between Paracoccidioides spp. antigens was observed when P. brasiliensis, P. restrepiensis antigens, and P. lutzii antigens were evaluated with the polyclonal antibodies against P. lutzii and P. brasiliensis, respectively. No cross-reactivity was obtained for polyclonal antibodies against Histoplasma capsulatum, Aspergillus fumigatus, and random blood donors. The proposed protocol allowed stable, repeatable, and reproducible genus-specific antigen production at a low cost and in a short cultivation time. Conclusion. The proposed protocol allowed us to obtain genus-specific antigens that can be developed and reproduced in all laboratories in Brazil and South America, where paracoccidioidomycosis is a neglected disease, contributing to an early diagnosis, especially in endemic regions, regardless of the species.

Introducción. Los métodos existentes para la producción de los antígenos de Paracoccidioides spp. son problemáticos en su estandarización, especificidad, estabilidad, repetibilidad y reproducibilidad. Objetivo. Optimizar la metodología para la producción de antígenos de Paracoccidioides spp. y evaluar su aplicabilidad en el inmunodiagnóstico de la paracoccidioidomicosis. Materiales y métodos. Los antígenos se obtuvieron de aislamientos de P. lutzii (01, 66 y 8334), P. brasiliensis sensu stricto (113) y P. restripiensis (B-339). Estos hongos se cultivaron a 36 °C ± 1 °C en agar Fava-Netto modificado, según Freitas et al. (2018). Los antígenos de P. lutzii se obtuvieron a los 5, 10 y 20 días de cultivo y los antígenos de P. brasiliensis y P. restripiensis se obtuvieron a los 10 días. Los antígenos se evaluaron in natura, concentrados 10 y 20 veces. La capacidad antigénica se evaluó mediante un ensayo de inmunodifusión doble con muestras de suero de pacientes con paracoccidioidomicosis, histoplasmosis, aspergilosis y donantes de sangre aleatorios. Resultados. Se observó reacción cruzada con Paracoccidioides spp. cuando se evaluaron los antígenos de P. brasiliensis, P. restrepiensis y P. lutzii frente a los anticuerpos policlonales contra P. lutzii y P. brasiliensis, respectivamente. No hubo reactividad cruzada con los anticuerpos policlonales contra Histoplasma capsulatum y Aspergillus fumigatus, ni contra los donantes de sangre aleatorios. El protocolo propuesto permitió la producción estable, repetible y reproducible de antígenos dirigidos de un género específico (Paracoccidiodes) en un tiempo corto de cultivo y a un menor costo. Conclusión. El protocolo propuesto permitió obtener antígenos específicos de un género, que pueden ser desarrollados y reproducidos en todos los laboratorios de Antígenos de Paracoccidioides spp.: protocolo rápido Brasil y Surámerica donde la paracoccidioidomicosis es una enfermedad endémica y desatendida. Estos antígenos pueden contribuir al diagnóstico precoz de la infección, independientemente de la especie.

Aspectos técnicos y clínicos de la prueba cruzada de histocompatibilidad en el trasplante de órganos solidos / Technical and clinical aspects of the histocompatibility crossmatch assay in solid organ transplantation

La presencia de anticuerpos dirigidos contra los antígenos leucocitarios humanos (Human Leukocyte Antigens, HLA) que se expresan en las células del donante, es uno de los factores de riesgo más importantes asociados con las complicaciones clínicas después del trasplante. La prueba cruzada es una de las pruebas de histocompatibilidad más eficaces para la detección de anticuerpos específicos contra el donante en los receptores de injertos. En los primeros métodos de la prueba cruzada, se utilizaba la citotoxicidad dependiente del complemento, que es útil para detectar dichos anticuerpos responsables del rechazo hiperagudo del injerto, pero carece de la sensibilidad adecuada. Por ello, se desarrollaron métodos de pruebas cruzadas más sensibles, entre ellas, la prueba cruzada por citometría de flujo que hoy se considera el método preferido. En este artículo se revisa la evolución de la prueba cruzada y los factores más importantes que deben tenerse en cuenta al realizarla y al interpretar los resultados de esta prueba fundamental para la supervivencia a largo plazo del injerto.

The presence of antibodies directed against human leukocyte antigens (HLA) expressed on donor cells is a significant risk factor for serious clinical complications after transplantation. The crossmatch assay is one of the most important tests available for the detection of donor-specific antibodies in potential allograft recipients. Early crossmatch methods utilized complement-dependent cytotoxicity, which is useful for detecting the donor-specific anti- HLA antibodies responsible for hyperacute allograft rejection but lacks adequate sensitivity. Consequently, more sensitive crossmatch methods have been developed, ultimately leading to the flow cytometry crossmatch as the currently preferred methodology. Herein, we review the evolution of the crossmatch assay and the most important factors to consider when performing and interpreting the results of this fundamental assay for ensuring the long-term survival of the transplanted organ.

Evaluación de pruebas inmunológicas en el diagnóstico de Giardia duodenalis y Cryptosporidium spp, Honduras / Evaluation of immunologic tests in the diagnosis of Giardia duodenalis and Cryptosporidium spp., Honduras

Antecedentes: No conocemos datos sobre evaluación de pruebas inmunológicas para mejorar el diagnóstico de Giardia duodenalis y Cryptosporidium spp., agentes etiológicos de diarrea de importancia mundial, en Honduras. Objetivos: Comparar dos pruebas inmunológicas para el diagnóstico de Giardia y Cryptosporidium spp. con microscopía de rutina y determinar su aplicabilidad local. Métodos: Estudio descriptivo transversal. En 2013, 134 muestras de heces recibidas en el Servicio de Parasitología del Hospital Escuela (HE) y 67 muestras del Centro de Salud Alonso Suazo (CSAS) se analizaron con una Prueba Rápida Inmunocromatográfica (PDR). En 2019-2020, 60 muestras de heces del HE se analizaron con una prueba inmunoenzimática ELISA. El protocolo de rutina incluyó examen directo en solución salina y solución de Lugol, coloración tricrómica y coloración ácido resistente modificada (ARM) (HE) y examen directo en solución salina y solución de Lugol (CSAS). Resultados: Cada prueba inmunológica mostró mayor positividad que la microscopía: en 134 muestras del HE para Giardia (6.7% vs 4.5%) y Cryptosporidium (3.7% vs 0.7%), similar en 67 muestras del CSAS (14.9% vs 7.5% para Giardia; 0.7% para Cryptosporidium con la prueba inmunológica). De 60 muestras analizadas por ELISA en HE, 31.7% fue positiva por Giardia vs 18.3% en examen directo y 23.3% en coloración tricrómica; 6.7% positiva por Cryptosporidium spp. vs 3.3% por coloración ARM. Discusión: Pruebas inmunológicas aumentaron significativamente el diagnóstico de ambas parasitosis; sin embargo, publicaciones sobre pruebas similares ofrecieron resultados no concluyentes. Por costo elevado podrían reservarse para pacientes pediátricos, pacientes inmunocomprometidos en hospitales, complementando microscopía. Los laboratorios de salud deben fortalecer capacidad diagnóstica...(AU)

Metaanálisis de la validez del inmunodiagnóstico del virus linfotrópico de células T humanas i/ii en bancos de sangre, 2000-2018 / Meta-analysis regarding the validity of the immunodiagnosis of human T-cell lymphotropic virus I/II in blood banks, 2000-2018 / Meta-análise da validade do imunodiagnóstico do vírus linfotrópico de células t humanas I/II em bancos de sangue, 2000-2018

Resumen Objetivo: Evaluar la validez del inmunodiagnóstico del htlv i/ii en bancos de sangre, con base en estudios publicados en la literatura científica. Metodología: Se efectuó un metaanálisis de pruebas diagnósticas siguiendo la guía prisma y las recomendaciones de Cochrane. Se evaluó la calidad metodológica con quadas y se garantizó la reproducibilidad y la exhaustividad. Se realizó también un análisis de efectos aleatorios para la sensibilidad, la especificidad, los cocientes de probabilidad, la razón de momios diagnóstica y la curva característica operativa del receptor (roc) con sus intervalos de confianza (ic) del 95 %. Resultados: Se tamizaron 4604 estudios, de los cuales solo tres cumplieron el protocolo. Se evaluaron 548 infectados con htlv i/ii y 6643 sanos. El inmunodiagnóstico de htlv i/ii presentó una sensibilidad del 99 % (ic95 % = 98,0-99,0), especificidad del 100 % (ic95 % = 99,9-100), cocientes de probabilidad positivo de 315,8 (ic95 % = 128,2-778,5) y negativo de 0,02 (ic95 % = 0,01-0,04), razón de momios diagnóstica de 24373 (ic95 % = 6864-86545) y área bajo la curva roc del 99,9 %. Conclusión: Se dispone de pocos estudios en este campo del inmunodiagnóstico htlv i/ii. El elevado número de sujetos analizados evidenció alta validez del inmunodiagnóstico, lo que resulta determinante para garantizar la inocuidad de las unidades de sangre, la detección de portadores asintomáticos, la disminución de la transmisión y el inicio de tratamiento.

Abstract Objective: To evaluate the validity of the immunodiagnosis of htlv i/ii in blood banks, based on studies published in the scientific literature. Methodology: A meta-analysis of diagnostic tests was carried out following the PRISMA guidelines and Cochrane recommendations. The methodological quality was evaluated with QUADAS, and reproducibility and completeness were guaranteed. A random effects analysis was also performed with respect to sensitivity, specificity, likelihood ratios, diagnostic odds ratio, and receiver operating characteristic curve (ROC) with their 95 % confidence intervals (CI). Results: 4,604 studies were screened, of which only three complied with the protocol. 548 subjects infected with HTLV I/II and 6,643 healthy subjects were evaluated. The immunodiagnosis of HTLV I/II had a sensitivity of 99 % (95 % CI = 98.0-99.0), a specificity of 100 % (95 % CI = 99.9-100), a positive likelihood ratio of 315.8 (95 % CI = 128.2-778.5) and a negative likelihood ratio of 0.02 (95 % CI = 0.01-0.04), a diagnostic odds ratio of 24,373 (95 % CI = 6,864-86,545), and an area under the ROC curve of 99.9 %. Conclusion: Few studies are available in the field of HTLV I/II immunodiagnosis. The high number of subjects analyzed showed high validity of the immunodiagnosis, which is decisive to guarantee the safety of the blood units, the detection of asymptomatic carriers, the decrease in transmission, and the start of treatment.

Resumo Objetivo: Avaliar a validade do imunodiagnóstico do HTLV I/II nos bancos de sangue, baseados nos estudos publicados na literatura científica. Metodologia: Foi realizada uma meta-análise de testes diagnósticos seguindo a guia PRISMA e as recomendações de Cochrane. Foi avaliada a qualidade metodológica com QUADAS e garantiu-se a reprodutibilidade e a integridade. Realizou-se também uma análise de efeitos aleatórios para a sensibilidade, a especificidade, os quocientes de probabilidade, a razão de probabilidade diagnóstica e a Curva Característica de Operação do Receptor (Curva ROC) com seus Intervalos de Confiança (IC) de 95%. Resultados: Foram selecionados 4604 estudos, dos quais somente 3 cumpriram com o protocolo. Foram avaliados 548 infectados com o vírus HTLV I/II e 6.643 saudáveis. O imunodiagnóstico de HTLV I/II apresentou uma sensibilidade de 99% (IC95% = 98,0-99,0), especificidade de 100% (IC95%= 99,9-100), quocientes de probalidade positiva de 315,8 (IC95% = 128,2-778,5) e negativo de 0,02 (IC95% = 0,01-0,04), razão de probabilidade diagnóstica de 24373 (IC95% = 6864-86545) e área sob a curva ROC de 99,9%. Conclusão: São poucos os estudos disponíveis neste campo do imunodiagnóstico HTLV I/II. O elevado número de pessoas analisadas evidenciou alta validade do imunodiagnóstico, o que é decisivo para garantir a inocuidade das unidades de sangue, a detecção de portadores assintomáticos, a diminuição da transmissão e o início do tratamento.

Analysis of the spatio-temporal dynamics of incidence, mortality and test rates (rapid and RT-PCR) of COVID-19 in the state of Minas Gerais, Brazil / Análise da dinâmica espaço-temporal da incidência, mortalidade e taxas de testes (rápidos e moleculares) da COVID-19 no estado de Minas Gerais, Brasil / Análisis de la dinámica espacio-temporal de la incidencia, mortalidad y tasas de prueba (rápida e RT-PCR) de COVID-19 en el estado de Minas Gerais, Brasil

Background and Objectives: A novel type of coronavirus, SARS-CoV-2, is responsible for an unprecedented pandemic with profound socioeconomic consequences. Owing to its recent discovery still represents a great unknown to researchers. Thus, this study aims to establish the spatio-temporal associations of the incidence, mortality, and the rate of both rapid and RT-PCR tests in Minas Gerais. Methods: This is a quantitative analysis of secondary data based on a cross-sectional research design. Incidence, mortality, date of the first notification of COVID-19 and number of rapid and RT-PCR tests were obtained from the sources: "GAL", "e-SUS VE" and "SES-MG". Pearson coefficient for correlation was calculated to establish the level of association between the relevant data. Descriptive statistical procedures were used to provide a comprehensive understanding of the distribution of incidence, mortality and test rates in the territory. Results: Positive correlations were found between the rate of rapid tests and incidence; rate of RT-PCR tests and incidence/mortality. At the municipal level, incidence, mortality, rate of rapid tests and RT-PCR revealed a negative correlation with days elapsed since the First Notified Case. The same effect occurs at the level of health macro-regions. Conclusion: The heterogeneity of the incidence and mortality of COVID-19 in the territory of Minas Gerais, as well as the rate of tests may be caused, in part, due to the different dates of introduction of the virus in the municipalities/macro-regions. It is speculated that this phenomenon occurs due to the dynamics of regional and inter-regional flows of people.(AU)

Justificativa e Objetivos: Um novo tipo de coronavírus, SARS-CoV-2, é responsável por uma pandemia sem precedentes com profundas consequências socioeconômicas. Devido à sua recente descoberta, o vírus surgido na cidade chinesa de Wuhan, em dezembro de 2019, ainda lança grandes incógnitas. Este estudo objetiva estabelecer as associações espaço-temporais da incidência; mortalidade; e taxas de testes rápidos e RT-PCR em Minas Gerais. Métodos: Trata-se de uma análise quantitativa de dados secundários a partir de um desenho de pesquisa transversal. Incidência, mortalidade, data da(s) primeira(s) notificações da doença, número de testes rápidos e de RT-PCR foram obtidos nas fontes: "Gerenciador de Ambiente Laboratorial", "e-sus VE" e SES-MG. O coeficiente de Pearson para correlação foi calculado para estabelecer o nível de associação entre os dados relevantes. Técnicas estatísticas descritivas foram empregadas para compreender a distribuição da incidência, mortalidade e taxas de testes no território. Resultados: Correlações positivas foram encontradas entre taxa de testes rápidos e incidência; taxa de testes RT-PCR e incidência/mortalidade. A nível municipal, incidência, mortalidade, taxa de testes rápidos e de RT-PCR têm correlação negativa com dias transcorridos desde o Primeiro Caso Notificado. O mesmo efeito ocorre, em diferentes intensidades, a nível das macrorregiões de saúde. Conclusão: A heterogeneidade da incidência e mortalidade da COVID-19 no território mineiro, assim como, das taxas de testes (rápidos e RT-PCR) pode ser causada, em parte, devido às diferentes datas de introdução do vírus nos municípios/macrorregiões de saúde. Especula-se que esse fenômeno se deve às dinâmicas dos fluxos regionais e inter-regionais de pessoas.(AU)

Justificación y Objetivos: El SARS-CoV-2 es responsable por una pandemia sin precedentes con profundas consecuencias socioeconómicas. Debido a su reciente descubrimiento, este vírus representa una gran incógnita para los investigadores. Así, este estudio tiene como objetivo establecer las asociaciones espacio-temporales de la incidencia, la mortalidad y la tasa de pruebas rápidas y RT-PCR en Minas Gerais. Métodos: Trata-se de un análisis cuantitativo de datos secundarios basado en un diseño de investigación transversal. Incidencia, mortalidad, fecha de la primera notificación de COVID-19 y número de pruebas rápidas y RT-PCR se obtuvieron de las fuentes: "GAL", "e-SUS VE" y "SES-MG". Se calculó el coeficiente de correlación de Pearson para establecer el nivel de asociación entre los datos relevantes. Se utilizaron procedimientos estadísticos descriptivos para proporcionar una comprensión integral de la distribución de la incidencia, la mortalidad y las tasas de prueba en el territorio. Resultados: Se encontraron correlaciones positivas entre la tasa de pruebas rápidas y la incidencia; tasa de pruebas de RT-PCR y incidencia/mortalidad. A nivel municipal, la incidencia, mortalidad, tasa de pruebas rápidas y RT-PCR revelaron una correlación negativa con los días transcurridos desde el Primer Caso Notificado. El mismo efecto ocorre a nivel de macrorregiones de salud. Conclusiones: La heterogeneidad de la incidencia y mortalidad de COVID-19 en el territorio de Minas Gerais, así como la tasa de pruebas puede deberse, en parte, a las diferentes fechas de introducción de la virus en los territorios. Se especula que este fenómeno ocurre debido a la dinámica de los flujos regionales e interregionales de personas.(AU)

Estandarización y utilidad de la contrainmunoelectroforesis para el diagnóstico de la bartonelosis / Standardization and utility of counterimmunoelectrophoresis for the diagnosis of bartonellosis

RESUMEN Introducción. La enfermedad de Carrión, causada por Bartonella bacilliformis, es una enfermedad reemergente en el Perú, que se diagnostica convencionalmente mediante el frotis sanguíneo y el cultivo, los cuales son métodos poco sensibles, necesitándose métodos diagnósticos alternativos. Objetivos. Determinar la sensibilidad y especificidad de la contrainmunoelectroforesis (CIEF) utilizando un antígeno sonicado obtenido de una cepa de Bartonella sp., para detectar anticuerpos contra la bacteria comparado con el cultivo como estándar de referencia. Métodos. El antígeno para la prueba se obtuvo por sonicación de un aislado de Bartonella sp., cultivado en un medio bifásico con y sin sangre de carnero. La reactividad del antígeno sonicado fue evaluada por la CIEF empleando 123 sueros de personas, de los cuales 60 fueron de pacientes con diagnóstico clínico y bacteriológico de enfermedad de Carrión, 54 de personas con otras infecciones y 9 de personas sanas. Para la estandarización de la prueba de CIEF se evaluaron el tamaño y la distancia entre los pocillos, así como la concentración del antígeno y los volúmenes de los reactivos usados. Resultados. La concentración óptima del antígeno fue de 0,64 mg/mL, la distancia entre los pocillos de 3 mm, el tamaño de los pocillos de 3 mm y el volumen de los reactivos de 12 μL. La CIEF estandarizada tuvo una sensibilidad de 43,3% y una especificidad de 98,4%. Conclusiones. Los resultados de la CIEF revelan una baja sensibilidad de la prueba, pudiéndose usar como una prueba confirmatoria dada su elevada especificidad, pero no puede ser utilizada como prueba de tamizaje serológico por su escasa sensibilidad.

ABSTRACT Introduction. Carrion's disease, caused by the bacterium Bartonella bacilliformis, is a reemerging disease in Perú, which is conventionally diagnosed by blood smear and culture, which are not very sensitive methods, requiring alternative diagnostic methods. Objectives. To determine the sensitivity and specificity of the counterimmunoelectrophoresis (CIEP) using a sonicated antigen obtained from a Bartonella sp. strain, to detect antibodies against the bacteria compared to the culture as reference standard. Methods. The test antigen was obtained by sonication of an isolate of Bartonella sp., grown in a biphasic medium with and without sheep blood. The reactivity of the sonic antigen was evaluated by the CIEP using 123 sera from people, of which 60 were from patients with a clinical and bacteriological diagnosis of Carrion's disease, 54 from people with other infections and 9 from healthy people. For the standardization of the CIEP test, the size and distance between the wells were evaluated, as well as the concentration of the antigen and the volumes of the reagents used. Results. The optimal concentration of the antigen was 0,64 mg/mL, the distance between the 3 mm wells, the size of the 3 mm wells and the volume of the reagents of 12 μL. The standardized CIEP had a sensitivity of 43,3% and a specificity of 98,4%. Conclusions. The results of the CIEP reveal a low sensitivity of the test, being able to be used as a confirmatory test given its high specificity but cannot be used as a serological screening test due to the low sensitivity referred to.

COVID-19: clinical and laboratory manifestations in novel coronavirus infection / COVID-19: manifestações clínicas e laboratoriais na infecção pelo novo coronavírus

ABSTRACT COVID-19 is a highly contagious disease caused by the coronavirus of severe acute respiratory syndrome 2 (SARS-CoV-2). In 2020, due to the outbreak, it was considered by the World Health Organization (WHO) as a pandemic. The infection caused by the novel coronavirus has high mortality in a small portion of the infected population, especially in elderly, immunosuppressed, diabetic, cardiac, and hypertensive individuals. Many infected are asymptomatic (and may be carriers) or present mild or moderate flu-like symptoms. The most severe clinical picture of COVID-19 is characterized by an inflammatory cytokine storm, with hematological changes and coagulation dysfunction, which can lead to tissue damage and death. Nonspecific laboratory biomarkers may be either increased or decreased as the course of the disease progresses and are often useful in predicting complications of the disease, such as the use of D-dimer and platelet/lymphocyte ratio. Specific laboratory diagnosis is based on the detection of viral ribonucleic acid (RNA) by real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) of nasal and oropharyngeal swab samples; it is more effective when performed in the first days after symptom onset. Serological tests are useful in detecting the immune response, since both class M (IgM) and class G (IgG) immunoglobulin antibodies can be detected seven days after the onset of clinical symptoms, and may extend for more than 25 days, although not exempting the individual from remaining infectious, depending on their viral load and clinical presentation. The rational use of specific laboratory markers must respect the disease chronology, and the correct interpretation may provide subsidies for a better management of affected patients, as well as identifying asymptomatic carriers or those with mild symptoms.

RESUMEN La COVID-19 es una enfermedad altamente contagiosa causada por el coronavirus del síndrome respiratorio agudo grave (SARS-CoV-2). En 2002, a causa del brote, fue reconocida como una pandemia por la Organización Mundial de la Salud (OMS). La infección por el nuevo coronavirus provoca alta mortalidad en una pequeña parcela de la población infectada, especialmente en ancianos, pacientes inmunodeprimidos, diabéticos, cardiópatas e hipertensos. Muchos infectados son asintomáticos (y pueden ser portadores) o presentan síntomas leves a moderados, como en un estado gripal. El cuadro clínico de la COVID-19 en la forma más grave es caracterizado por una tormenta inflamatoria de citoquinas, con cambios hematológicos y de la coagulación que pueden llevar a daño tisular y muerte. Pruebas de laboratorio inespecíficas pueden presentar tasas más altas o bajas según el curso de la enfermedad, y muchas veces son útiles en la predicción de complicaciones, como el uso del dímero D y la ratio plaquetas/linfocitos. El diagnóstico de laboratorio específico se basa en la detección del ácido ribonucleico (ARN) viral por reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en tiempo real de muestras de hisopado nasal y orofaríngeo; es más efectiva en los primeros días tras el inicio de los síntomas. Pruebas serológicas son útiles para detectar la respuesta inmune, pues tanto los anticuerpos de la inmunoglobulina M (IgM) como de la G (IgG) pueden se detectar siete días después del inicio de los síntomas clínicos, y pueden permanecer por más de 25 días, aunque no eximen al individuo de seguir infeccioso, dependiendo de su carga viral y presentación clínica. El uso racional de los marcadores de laboratorio específicos debe respetar la cronología de la enfermedad, y la interpretación correcta puede proporcionar recursos para un mejor manejo de los pacientes afectados, así como identificar portadores asintomáticos o con pocos síntomas.

RESUMO COVID-19 é uma doença altamente contagiosa provocada pelo coronavírus da síndrome respiratória aguda grave 2 (SARS-CoV-2). Em 2020, devido ao surto, foi caracterizada pela Organização Mundial da Saúde (OMS) como pandemia. A infecção causada pelo novo coronavírus tem alta mortalidade em uma pequena parcela da população infectada, especialmente em indivíduos idosos, imunodeprimidos, diabéticos, cardiopatas e hipertensos. Muitos infectados são assintomáticos (e podem ser portadores) ou apresentam sintomas leves a moderados, semelhantes ao estado gripal. O quadro clínico da COVID-19 na forma mais severa é caracterizado por uma tempestade inflamatória de citocinas, com alterações hematológicas e da coagulação que podem levar ao dano tecidual e morte. Exames laboratoriais inespecíficos podem apresentar-se mais elevados ou diminuídos conforme o curso da doença, e muitas vezes são úteis na predição de complicações, como o uso do D-dímero e a razão plaqueta/linfócitos. O diagnóstico laboratorial específico se baseia na detecção do ácido ribonucleico (RNA) viral por reação em cadeia da polimerase em tempo real (RT-PCR) de amostras de suabe nasal e orofaríngeo; é mais efetivo nos primeiros dias após o início dos sintomas. Testes sorológicos são úteis na detecção da resposta imune, pois tanto os anticorpos da imunoglobulina da classe M (IgM) quanto da classe G (IgG) podem ser detectados após sete dias do início dos sintomas clínicos, podendo se estender por mais de 25 dias, embora não isente o indivíduo de continuar infectante, dependendo de sua carga viral e apresentação clínica. O uso racional dos marcadores laboratoriais específicos deve respeitar a cronologia da doença, e a interpretação correta pode fornecer subsídios para um melhor manejo dos pacientes acometidos, bem como identificar portadores assintomáticos ou com pouco sintomas.

Seroprevalence of Hepatitis C Virus in a blood bank of Medellín-Colombia, 2005-2018 / Seroprevalencia del virus de la hepatitis c en un banco de sangre de medellín-colombia, 2005-2018

RESUMEN El objetivo de este estudio fue estimar la seroprevalencia del virus de la hepatitis C (VHC) en donantes de un banco de sangre de Medellín- Colombia en el periodo 2005-2018 e identificar sus factores asociados. Se realizó un estudio ecológico mixto con 166603 sujetos. La descripción se realizó con frecuencias, series de tiempo con las seroprevalencias y sus intervalos de confianza del 95 %. Se estimaron razones de odds crudas y ajustadas mediante regresión logística binaria en SPSS 25.0®. La seroprevalencia fue 0,567 % (IC 95 % = 0,53-0,60) con una endemia baja y estable desde el 2010. Los únicos factores que presentaron diferencias estadísticas en la seroprevalencia fueron el grupo etario y la frecuencia de donación, con una infección 23 % mayor en los donantes con edad mayor de 40 años (frente a las personas con edad entre 18-40), y 94 % mayor en los donantes de primera vez, en comparación con quienes donan a repetición . Se concluye que en Medellín los niveles endémicos del VHC han sido estables y bajos en la última década, evidenciando la importancia de la vigilancia epidemiológica que realizan los bancos de sangre. La menor prevalencia en la última década hace suponer una exposición diferencial al virus en función de la generación a la que se pertenece, de manera que el efecto de cohorte de nacimiento debe ser investigada en estudios posteriores.

ABSTRACT The objective of this study was to estimate the seroprevalence of hepatitis C virus (HCV) in donors of a Medellín-Colombia blood bank in the 2005-2018 period and to identify its associated factors. A mixed ecological study was conducted with 166603 donors. The description was made with frequencies, time series with seroprevalences and their 95 % confidence intervals. Odds ratios were estimated raw and adjusted by binary logistic regression in SPSS 25.0®. The seroprevalence was 0.567 % (95 % CI = 0.53-0.60) with a low and stable endemicity since 2010. The only factors that presented statistical differences in seroprevalence were the age group and the frequency of donation, with an infection 23 % higher in donors aged over 40 years (compared to people aged 18-40), and 94 % higher in first-time donors, compared to repeat ones. It is concluded that in Medellín the endemic levels of HCV have been stable and low in the last decade, evidencing the importance of the epidemiological surveillance carried out by blood banks. The lower prevalence in the last decade suggests a differential exposure to the virus depending on the generation to which it belongs, so that the birth cohort effect that should be studied in later research.

Meta-analyses of the validity and performance of screening tests for Hepatitis C Virus in the blood banks, 2000-2018 / Metaanálisis de la validez y el desempeño de las pruebas de tamización del virus de la hepatitis c en bancos de sangre, 2000-2018

RESUMEN Este estudio evaluó la validez y desempeño del inmunodiagnóstico del virus de la hepatitis C (VHC), con base en estudios publicados en la literatura científica mundial. Se diseñó y validó un protocolo de búsqueda y selección de investigaciones en las fases de la guía PRISMA, se analizaron los parámetros de sensibilidad, especificidad, cocientes de probabilidad, razón de odds y curva ROC, en MetaDisc. Se tamizaron 4602 estudios, de los cuales sólo 545 se realizaron en bancos de sangre y 18 evaluaron la validez diagnóstica de las pruebas para el VHC. La mayoría de los estudios fueron de Europa y Asia, con un 78 % basados en determinación de anticuerpos. Los estudios con detección de anticuerpos se realizaron en 21 483 donantes sanos y 3 145 infectados en quienes se halló una sensibilidad de 97,8 % (IC 95 % = 97,3 - 98,2), especificidad 99,0 % (IC 95 % = 98,9 - 99,2), cociente de probabilidad positivo 75,4 (IC 95 % = 27,2 - 209,2) y negativo de 0,02 (IC 95 % = 0,01 - 0,07) y área bajo la curva de 99,8 %. Se concluye que la detección de anticuerpos presenta excelente validez, desempeño y utilidad diagnóstica para la detección del VHC en donantes de sangre y población general.

ABSTRACT This study evaluated the validity and performance of the immunodiagnosis of the Hepatitis C Virus (HCV), based on studies published in the worldwide scientific literature. A search and selection research protocol was designed and validated in the phases of the PRISMA guide, the parameters of sensitivity, specificity, likelihood ratios, odds ratio, and ROC curve were analyzed in MetaDisc. 4602 studies were screened, of which only 545 were performed in blood banks and 18 evaluated the diagnostic validity of the tests for HCV. Most studies were from Europe and Asia, with 78 % based on antibody determination. Studies with antibody detection were carried out in 21483 healthy donors and 3145 infected patients in whom a sensitivity of 97.8 % (95 % CI = 97.3 - 98.2) was found, 99.0 % specificity (95 % CI = 98.9 - 99.2), positive likelihood ratio 75.4 (95 % CI = 27.2 - 209.2) and negative of 0.02 (95% CI = 0.01 - 0.07) and area under the curve 99.8 %. It is concluded that the detection of antibodies presents excellent validity, performance, and diagnostic utility for the detection of HCV in blood donors and the general population.

Sensibilidad y especificidad de pruebas inmunocromatográficas utilizadas en el nuevo algoritmo de diagnóstico de VIH en Bolivia / Sensitivity and specificity of inmunocromatographic tests used in the new algorithm of HIV diagnosis in Bolivia

OBJETIVO: evaluar la sensibilidad y especificidad de dos pruebas rápidas utilizadas en el nuevo algoritmo de diagnóstico de VIH en Bolivia, Alere Determine TM HIV 1/2 como prueba de tamizaje y Uni-Gold TM HIV como prueba confirmatoria. MÉTODOS: estudio descriptivo, no experimental. Se utilizaron 60 muestras de suero provenientes de diferentes establecimientos de salud de Cochabamba con resultados reactivos para VIH, enviadas a LABIMED desde enero a junio de 2016 para confirmación. Las 60 muestras (27 positivas y 33 negativas para VIH) fueron procesadas con Alere Determine TM HIV 1/2 y Uni-Gold TM HIV. RESULTADOS: alere Determine TM HIV 1/2 presentó una sensibilidad del 100% y una especificidad del 54,5%. Uni-Gold TM HIV reportó una especificad del 97% y una sensibilidad del 92,6% Conclusiones: la sensibilidad de Alere Determine TM HIV 1/2 cumplió con el criterio del Ministerio de Salud y Deportes de Bolivia (Prueba rápida de tamizaje debe tener una sensibilidad ≥ 99,8%). La especificidad de Uni-Gold TM HIV en este estudio no alcanzó el criterio de especificidad del Ministerio (Prueba rápida de confirmación debe tener una especificidad ≥ 99,9%).

OBJECTIVE: to evaluate the sensitivity and specificity of the two rapid tests used in the new algorithm of HIV diagnosis in Bolivia, Alere DetermineTM HIV 1/2 as a screening test and Uni-Gold TM HIV as a confirmatory test. METHODS: this is a descriptive and non-experimental study. Sixty serum samples were used with reactive results for HIV from different health establishments in Cochabamba sent to LABIMED from January to June 2016 for HIV confirmation. The 60 samples (27 positive and 33 negative for HIV) were tested with Alere DetermineTM HIV 1/2 and Uni-GoldTM HIV. RESULTS: Alere DetermineTM HIV 1/2 presented a sensitivity of 100 % and a specificity of 54,5%. Uni-GoldTM HIV reported a sensitivity of 92,6% and a specificity of 97%. Conclusions: the sensitivity of Alere Determine TM HIV 1/2 fulfilled the criteria of the Ministry of Health and Sports of Bolivia (rapid screening test must have a sensitivity ≥ 99.8%). The specificity of Uni-GoldTM HIV in this study did not fulfill the Ministry's specificity criterion (rapid confirmation test must have a specificity ≥99.9%).

Cut-off values of immunological tests to identify patients at high risk of severe lupus nephritis

Cut-off values for anti-dsDNA, anti-nucleosome and anti-C1q antibodies tests and for complement-mediated hemolytic activity (CH50) were explored to identify patients with high risk of developing severe lupus nephritis (LN). Forty-one patients with confirmed systemic lupus erythematosus (SLE) were identified; their levels for the three antibodies and complement had been measured on a same serum sample. These patients were classified based on the presence of renal involvem ent; sixteen had active proliferative LN. With the cut-off values accepted in the laboratory for SLE diagnosis (anti-dsDNA > 100 UI/ml, anti-nucleosome > 50 U/ ml or CH50 < 190 UCH50%) no significant differences were found between patients with and without LN. Anti-C1q > 40 U/ml showed a statistically significant association with LN and had 80% of specificity. Cut-off values for LN identified by Receiver Operating Characteristic curves (ROC) were higher for anti-dsDNA (> 455 IU/ml) and anti-nucleosome (>107 U/ml), lower for CH50 (< 150 UCH50%) and, for anti-C1q (> 41 U/ml) coincided with the cut-off values accepted for SLE. Anti-C1q > 134 U/ml had a 92% of specificity, 56% of sensibility and was associated with a fifteen-fold increased risk of LN. The simultaneous presence of anti-nucleosome > 107 U/ml and anti-C1q > 134 U/ml was associated with a 27-fold higher probability for LN. According to these results, the cut-off values used to detect SLE activity could be inadequate to identify patients at high risk of severe LN.

Se exploraron valores de corte para los ensayos de anti-ADNdc, anti-nucleosoma, anti-C1q y complemento hemolítico total (CH50) capaces de identificar los casos con mayor riesgo de nefritis lúpica (NL) grave. Se seleccionaron 41 pacientes ≥ 16 años con lupus eritematoso sistémico (LES) confirmado que tenían titulados los niveles de los tres anticuerpos y CH50, en una misma muestra de suero. Fueron clasificados según presencia de compromiso renal; 16 presentaron formas proliferativas de NL activa. Con los valores de corte aceptados por el laboratorio para el diagnóstico de LES (anti-ADNdc > 100 UI/ml, anti-nucleosoma > 50 U/ml o un CH50 < 190 UCH50%) no se encontraron diferencias significativas entre casos con y sin NL. Un anti-C1q > 40 U/ml tuvo una especificidad del 80% y mostró una asociación estadísticamente significativa con NL. Al aplicar curvas Receiver Operating Characteristic (ROC) para NL, se identificaron valores de corte más altos para anti-ADNdc (> 455 IU/ml) y anti-nucleosoma (> 107 U/ml), más bajo para CH50 (< 150 UCH50%) y para el anti-C1q (> 41 U/ml) coincidió con el aceptado para diagnóstico de LES. Un anti-C1q > 134 U/ml presentó una sensibilidad del 56%, una especificidad del 92% y se asoció con quince veces más riesgo de NL. La presencia simultánea de anti-C1q > 134 U/ml y anti-nucleosoma > 107 U/ml se asoció 27 veces más riesgo de NL. De acuerdo a estos resultados los valores de corte empleados para actividad en pacientes con LES podrían resultar inadecuados para identificar pacientes con mayor riesgo de NL grave.

Validez de tres métodos de inmuno-diagnóstico de neurocisticercosis: revisión sistemática de la literatura con meta-análisis 1960-2014 / Validity of three methods for inmuno-diagnostic of neurocysticercosis: systematic review of the literature with meta-analysis 1960-2014

Introduction: The screening of neurocysticercosis is complex and immunological methods have varying validity. Objective: To evaluate the validity of ELISA for antigen and antibody, and EITB for antibody in the screening of neurocysticercosis. Methods: Meta-analysis of diagnostic tests with an ex-ante protocol implemented in five databases with 15 search strategies, ensuring reproducibility in the selection and extraction of information. Sensitivity, specificity, likelihood ratios (LR), diagnostic odds ratio and ROC curve were estimated in MetaDiSc, and predictive values, and Youden index were estimated in Epidat. Results: EITB presented sensitivity of 85.7% (95% CI 83.5-87.7), specificity 93.9% (95% CI = 92.7-95.0), PLR 19.6 (95% CI = 8,6-44.6), NLR 0.16 (95% CI = 0.12-0.21), OR diagnostic 136.2 (95% CI = 54.7-342.6) and area under the curve 0.926. In ELISA for antibody sensitivity was 87.5% (95% CI = 86.1-88.8), specificity 92.2% (95% CI = 91.4-93.0), PLR 11.3 (95% CI = 8.45-15.11), NLR 0.15 (95% CI = 0.13-0.18), diagnostic OR 87.4 (95% CI = 60.1-127.1) and area under the curve 0.950. ELISA for antigen showed low diagnostic validity. No differences were found in these parameters by sample, antigen or antibody type. Conclusion: ELISA for antibodies and EITB have a similar diagnostic value, detection of serum and CSF showed a similar validity.

Introducción: La tamización de neurocisticercosis es compleja y los métodos inmunológicos presentan validez variable y generalmente bajos tamaños de muestra. Objetivo: Evaluar la validez de ELISA para detección de antígeno y anticuerpo, y EITB para detección de anticuerpo en la tamización de neurocisticercosis. Métodos: Meta-análisis de pruebas diagnósticas con un protocolo ex-ante aplicado en cinco bases de datos con 15 estrategias de búsqueda, garantizando reproducibilidad en la selección y extracción de la información. Se estimó sensibilidad, especificidad, cocientes de probabilidad (CP), razón de odds diagnósticas y curva ROC en MetaDiSC, y valores predictores, índice de Youden y exactitud en Epidat. Resultados: EITB presentó sensibilidad de 85,7% (IC 95% = 83,5-87,7), especificidad 93,9% (IC9 5% = 92,7-95,0), CPP 19,6 (IC 95% = 8,6-44,6), CPN 0,16 (IC 95% = 0,12-0,21), OR diagnóstica 136,2 (IC 95% = 54,7-342,6) y área bajo la curva 0,926. En ELISA para anticuerpos la sensibilidad fue 87,5% (IC 95% = 86,1-88,8), especificidad 92,2% (IC 95% = 91,4-93,0), CPP 11,3 (IC 95% = 8,45-15,11), CPN 0,15 (IC 95% = 0,13-0,18), OR diagnóstica 87,4 (IC 95% = 60,1-127,1) y área bajo la curva 0,950. ELISA para antígeno presentó baja validez diagnóstica. No se hallaron diferencias en estos parámetros según tipo de muestra, antígeno o anticuerpo. Conclusión: ELISA para anticuerpos y EITB presentan una utilidad diagnóstica similar, la detección de suero presentó una validez similar al líquido cefalorraquídeo.

Producción y evaluación del antígeno recombinante TES-30 de Toxocara canis para el inmunodiagnóstico de toxocariasis / Production and evaluation of the recombinant antigen TES-30 of Toxocara canis for the immunodiagnosis of toxocariasis

Introducción. Toxocara canis es un nematodo patógeno de cánidos que accidentalmente puede ser transmitido a los humanos. A pesar de la importancia de la serología para el diagnóstico de esta zoonosis, los kits diagnósticos usan antígenos crudos de excreción-secreción, en su mayoría glucoproteínas que no son específicas de especie, por lo cual pueden presentarse reacciones cruzadas con anticuerpos generados contra otros parásitos. Objetivos. Producir el antígeno recombinante TES-30 de T. canis y evaluarlo para el inmunodiagnóstico de la toxocariasis. Materiales y métodos. Se clonó el gen que codifica TES-30 en el vector de expresión pET28a (+), usando oligonucleótidos de cadena sencilla unidos mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR). La proteína rTES-30 se purificó por cromotografia de afinidad (Ni 2+ ). La reacción serológica de rTES-30 se evaluó mediante immunoblot . Teniendo en cuenta que no existe una prueba de referencia , se observó el comportamiento del antigeno en comparación con la prueba de rutina para el inmunodiagnóstico de la toxocariasis, es decir, la técnica ELISA convencional con antígenos de excreción-secreción. Resultados. El rTES-30 se produjo a partir de un cultivo de Escherichia coli LB, con un rendimiento de 2,25 mg/l y 95 % de pureza. La concordancia de la reacción entre el immunoblot rTES-30 y la ELISA convencional, fue de 73 % (46/63) y de 100 % con los 21 sueros no reactivos. De los 21 sueros con diagnóstico de otras parasitosis, 19 fueron reactivos con ELISA, mientras que tan solo siete fueron positivos con el immunoblot rTES-30. La concordancia entre la ELISA y el immunoblot fue moderada (índice kappa de 0,575; IC 95% 0,41-0,74). Conclusiones. Los datos presentados respaldan la utilidad del immunoblot r TES-3 0 para la confirmación de los posibles positivos por ELISA, no solo en los estudios epidemiológicos, sino también, como candidato para el desarrollo de pruebas diagnósticas de la toxocariasis ocular en Colombia.

Introduction: Toxocara canis is a pathogenic nematode of canines which can be accidentally transmitted to humans. Although serology is the most important diagnostic tool for this zoonosis, diagnostic kits use crude excretion/secretion antigens, most of them being glycoproteins which are not species-specific and may cross-react with antibodies generated against other parasites. Objectives: To produce the rTES-30 recombinant antigen of Toxocara canis and evaluate it in the immunodiagnosis of toxocariasis. Materials and methods: The gene that codes for TES-30 was cloned in the expression vector pET28a (+) using single-stranded oligonucleotides united by PCR. The protein rTES-30 was purified by Ni 2+ affinity chromotography. Seroreactivity of rTES-30 was evaluated by immunoblot. Given that there is no gold standard test, the behaviour of the antigen was compared with the method that is routinely used to immunodiagnose toxocariasis, i.e., the conventional ELISA technique using excretion/secretion antigens. Results: The rTES-30 was produced from an Escherichia coli LB culture which yielded 2.25 mg/L of the antigen with a purity of 95%. The results obtained showed 73% (46/63) concordance of reactivity between the rTES-30 immunoblot and the conventional ELISA, and 100% concordance with the non-reactive sera (21). Nineteen of the 21 sera positive for other parasitoses reacted with ELISA, while only seven of these were positive with the rTES-30 immunoblot. Concordance between the ELISA and the immunoblot was moderate (kappa coefficient: 0.575; 95% CI: 0.41- 0.74). Conclusions: The data presented show the potential of the rTES-30 inmunoblot for confirmation of possible ELISA positives, not only in epidemiological studies, but also as a candidate for the development of diagnostic tests for ocular toxocariasis in Colombia.

Estandarización de la técnica de aglutinación directa para el inmunodiagnóstico de la enfermedad de Chagas / Standardization of a direct agglutination test for the immunodiagnosis of Chagas disease

Introducción. La enfermedad de Chagas es causada por el parásito Trypanosoma cruzi y su diagnóstico inmunológico se basa principalmente en la detección de anticuerpos contra T. cruzi mediante pruebas tales como ELISA, inmunofluorescencia indirecta (IFI) y hemaglutinación indirecta (HAI). Esta última tiene el inconveniente de requerir la preparación de eritrocitos de carnero, difíciles de obtener y de poca duración. Sin embargo, existen pruebas alternativas, como la técnica de aglutinación directa. Objetivo. Estandarizar la técnica de aglutinación directa para el diagnóstico de la enfermedad de Chagas. Materiales y métodos. Se prepararon parásitos epimastigotes de T. cruzi mediante dos protocolos, con tratamiento con tripsina y sin él. Los parásitos se colorearon, y se determinaron las condiciones óptimas de concentración parasitaria y diluciones de suero. Se utilizaron sueros de pacientes con enfermedad de Chagas, de individuos sanos y con otras parasitosis. Resultados. La concentración parasitaria óptima fue de 500 x10 6 parásitos/ml, utilizando parásitos coloreados y sin tratamiento con tripsina. Las diluciones de suero óptimas fueron de 1/25, 1/50 y1/100, y el punto de corte, la dilución de 1/50. La técnica estandarizada mostró índices diagnósticos de sensibilidad de 94,3 % (IC 95% 79,5-99,0) y de especificidad de 96,3 % (IC 95% 88,8-99,0); se encontró reacción cruzada en tres sueros de individuos con leishmaniasis visceral, con valores pronósticos positivo y negativo de 91,7 % (IC 95% 76,4-97,8) y de 97,5 % (IC 95% 90,4-99,6), respectivamente. Se compararon los resultados con los obtenidos por HAI, ELISA e IFI y la concordancia fue de 96 % con un índice kappa de 0,90 (IC 95% 0,81-0,99). Conclusión. La técnica de aglutinación directa estandarizada podría ser útil para el inmunodiagnóstico de la enfermedad de Chagas.

Introduction: Chagas´ disease is caused by the parasite Trypanosoma cruzi and its immunological diagnosis is mainly based on the detection of antibodies against T. cruzi using tests such as the ELISA, the indirect fluorescence antibody test (IFAT) and the indirect hemagglutination test (IHAT). The main disadvantage of the IHAT is the need to prepare sheep erythrocytes, whose availability is limited and they have a short duration once prepared. However, there are alternative tests, such as the direct agglutination test (DAT). Objective: To standardize the direct agglutination test for the diagnosis of Chagas disease. Materials and methods: Trypanosoma cruzi epimastigotes were prepared using two protocols, with and without trypsin treatment. The parasites were stained and optimal conditions for parasitic concentration and serum dilutions were determined. We evaluated the technique using sera from patients with Chagas disease, from healthy individuals and from individuals with other parasitic diseases. Results: The optimal parasitic concentration was 500 x 10 6 parasites/ml using stained parasites without trypsin treatment. The optimal serum dilutions were 1/25, 1/50 y 1/100 and the cut-off point was the 1/50 dilution. The diagnostic indices for the standardized technique were as follows: Sensitivity, 94.3% (95% CI: 79.5-99.0) and specificity, 96.3% (95% CI: 88.8-99.0), with positive and negative predictive values ?? of 91.7% (95% CI: 76.4-97.8) and 97.5% (95% CI: 90.4-99.6), respectively. Cross-reaction was observed only in three sera from individuals with visceral leishmaniasis. The results were compared with those obtained by IHA, ELISA, and IFA, and the concordance rate was 96% and the kappa index, 0.90 (95% CI: 0.81-0.99). Conclusion: The standardized direct agglutination test could be useful for immunodiagnosis of Chagas disease.

Variaciones en el número y función de los linfocitos asesinos naturales durante infecciones recurrentes o graves / Variation in NK cell number and function in individuals with recurrent or severe infections

Introducción. Existen pocos datos sobre los defectos que afectan el desarrollo y función de los linfocitos asesinos naturales ( natural killers, NK) en pacientes con un incremento anormal en la recurrencia de infecciones. Objetivo. Realizar una evaluación sistemática de las diferentes subpoblaciones y la función de estas células en pacientes con infecciones recurrentes. Materiales y métodos. Se incluyeron 20 pacientes con infecciones graves o recurrentes y se analizaron las subpoblaciones y la respuesta citotóxica de los linfocitos NK en sangre periférica. Los resultados de los pacientes se compararon con controles sanos pareados por edad y sexo. Resultados. Los pacientes con episodios infecciosos activos presentaron anormalidades transitorias en el porcentaje o el número absoluto de linfocitos NK. Se caracterizaron, además, cinco pacientes con alteraciones persistentes en la distribución de las subpoblaciones de linfocitos NK. Estas alteraciones se debieron principalmente a la disminución de células CD56 dim CD16 bright . Se evidenciaron, también, defectos en la función de los linfocitos NK en algunos de nuestros pacientes; sin embargo, estas alteraciones fueron transitorias y se asociaron principalmente a la fase activa de la enfermedad. Conclusiones. Nuestros resultados evidencian defectos transitorios en el número y función de los linfocitos NK en pacientes con infecciones recurrentes o graves, además de alteraciones persistentes en los LNK CD56 dim CD16 bright en algunos individuos. Es necesario profundizar en los mecanismos que conllevan al desarrollo de estos defectos inmunes y estudiar cómo estas alteraciones influyen en la respuesta inmune.

Introduction: The information about defects affecting natural killer cell (NK) development and activity in patients with an abnormal increase of recurrent infections is scarce. Objective: To perform a systematic analysis of NK abnormalities in patients with recurrent infections. Materials and methods: Our study enrolled twenty patients with severe or recurrent viral infections. Natural killer cell subsets, surface receptors expression and cytotoxicity were analyzed. Results were compared with those from age- and sex-matched healthy controls. Results: Transient alterations were observed in the percentages and absolute numbers of NK cells in patients with infection active episodes. We also described five patients with stable disturbances in the distribution of NK cell subpopulations. These defects are mainly due to a decrease in the CD56 dim CD16 bright cells in peripheral blood. In addition, NK cell function abnormalities were observed in some patients, however, those were always transient and mainly associated to active disease. Conclusions: These findings demonstrate transient alterations in the percentages and absolute numbers of NK cells in patients with recurrent or severe infection. Also, stable disturbances in CD56 dim CD16 bright NK cells are observed in these patients. Nevertheless, these parameters must be thoroughly studied to determine the mechanisms that entail these immune abnormalities and investigate how they alter the immune response.

Cisteínoproteasas Catepsinas L de Taenia solium: Rol biológico en la infección y potencial uso para el inmunodiagnóstico de la neurocisticercosis / Cathepsin L Cysteine Protease from Taenia solium: Its biological role in the infection and potential use for the immunodiagnosis of neurocysticercosis

Taenia solium es un helminto aplanado responsable de la teniosis y de la cisticercosis humana, siendo esta última producida por el consumo de huevos infectivos. Los cisticercos pueden desarrollarse en diferentes tejidos del hombre, frecuentemente en el sistema nervioso central causando la neurocisticercosis (NCC). Para el diagnóstico de la NCC se requiere de una adecuada interpretación de datos clínicos, resultados de neuroimagen y pruebas serológicas. Sin embargo, las pruebas serológicas podrían mejorarse con el desarrollo de antígenos candidatos capaces de incrementar su sensibilidad y especificidad. En los últimos años se han descrito una serie de proteínas de superficie y de secreción de T. solium esenciales para la interacción parásito-hospedero. Una de estas familias son las cisteínoproteasas catepsinas L, las cuales cumplen un rol preponderante para el desarrollo y supervivencia del parásito, participando en la invasión tisular, la evasión de la respuesta inmune, el desenquistamiento y enquistamiento del cisticerco. Son consideradas como antígenos potenciales para el inmunodiagnóstico de la neurocisticercosis.

Taenia solium is a plane helminth responsible for taeniasis and human cysticercosis, the latter being the result of the consumption of infective eggs. Cysticerci can develop in different human tissues, often in the central nervous system, causing neurocysticercosis (NCC). For the diagnosis of NCC, an adequate interpretation of clinical data, neuroimaging results and serological tests are required. However, serological tests could be improved by developing candidate antigens able to increase their sensibility and specificity. In the last years, a series of surface and secretory proteins of T. solium essential for the parasite-host interaction have been described. One of these families is cathepsin L cysteine proteases, which have a predominant role in the development and survival of the parasite. They take part in the tissue invasion, immune response evasion, excystation and encystment of cysticercus. They are considered potential antigens for the immunodiagnosis of neurocysticercosis.

Actualización en diagnóstico del dengue: evolución de las técnicas y su aplicación real en la clínica / Update on dengue diagnosis: techniques evolution and their clinical application

Resumen: El dengue es la enfermedad viral transmitida por vectores de mayor importancia en el mundo. Debido a que hasta el momento no existe una vacuna licenciada para la prevención de la infección ni una terapia específica para controlar la enfermedad, el diagnóstico temprano y específico resulta ser una herramienta de vital importancia para brindar un tratamiento rápido y oportuno al paciente. Aunque hace más de seis décadas se dispone de una variedad de técnicas de laboratorio para el diagnóstico de esta enfermedad, es frecuente encontrar que noexista un consenso en el personal o en las entidades colombianas encargadas del diagnóstico de laboratorio sobre las ventajas y las limitaciones de estas técnicas, lo que dificulta dichodiagnóstico. Adicionalmente, debido a que la mayoría de técnicas que se usan se basan en la respuesta inmune frente al virus, y se pueden presentar reacciones cruzadas con otros virusgenéticamente relacionados, la posibilidad de falsos positivos es alta. Principalmente, por estarazón, en los últimos años ha aumentado el desarrollo y la validación de técnicas moleculares,ya que son más sensibles, específicas y rápidas que las técnicas celulares e inmunológicas.Teniendo en cuenta estos antecedentes, se hace necesario comparar a la luz de la literatura disponible la utilidad real de las técnicas de laboratorio existentes, clasificándolas en celulares,inmunológicas y moleculares.

Abstract: Dengue is the vector-borne viral disease of major importance in the world. Because so far there is no licensed vaccine that can be used to prevent the infection and there is no specific antiviral treatment, the early and specific diagnosis is a powerful tool to provide prompt and timely management of the patient. Despite during more than six decades there has been available a wide variety of laboratory techniques that can be used for the diagnosis of dengue, there is often lack of a consensus among the people or entities responsible of the diagnosis about the advantages and disadvantages of these techniques; for this reason, the diagnosis of dengue is more difficult. Moreover, taking into account that most of the techniques used are based on the immune response against dengue virus, and a cross reactivity with other viruses genetically related could be possible; the possibility of false positives is high. Accordingly, in recent years the development and validation of molecular techniques has increased, as they are more sensitive, specific and rapid than the cellular and immunological techniques. Therefore, it is necessary to compare the usefulness of laboratory techniques to dengue diagnosis, such as cellular, immunological and molecular tests.

Prevalencia de teniosis y seroprevalencia de cisticercosis humana en Pampa Cangallo, Ayacucho, Perú 2008 / Taeniosis prevalence and human cysticercosis seroprevalence in Pampa Cangallo, Ayacucho, Peru 2008

Para estimar la prevalencia de teniosis y la seroprevalencia de cisticercosis humana en la población del distrito de Pampa Cangallo, en la sierra central de Perú (Ayacucho); se realizó un estudio transversal en el año 2008, con 368 personas de 5 a 70 años de edad. El diagnóstico de teniosis se efectuó mediante la prueba coproparasitológica (sedimentación rápida) mientras que para el diagnóstico de cisticercosis se realizó un tamizaje con la prueba de ELISA, y los casos positivos fueron confirmados por inmunoblot. Se encontró cinco casos positivos a huevos de Taenia sp, lo que representa una prevalencia de teniosis de 1,4 por ciento (IC95 por ciento: 0,2 - 2,5 por ciento), siendo los individuos entre los 20 a 49 años los que presentan la mayor proporción. Se encontró una seroprevalencia de cisticercosis de 3,3 por ciento (IC95 por ciento: 1,4 - 5,1 por ciento) por 12 casos positivos, siendo más frecuente en mujeres. No se encontró asociación con ninguno de los factores estudiados. Si bien la prevalencia es baja, se confirma la existencia de la teniosis y cisticercosis en esta población, por lo que se sugiere el establecimiento de estrategias de prevención y control, con énfasis en la educación comunitaria.

To estimate the taeniosis prevalence and human cysticercosis seroprevalence in a rural town from the Peruvian central Andes (Pampa Cangallo, Ayacucho), we performed a cross sectional study in 2008, included 368 people between 5 and 70 years. Fast sedimentation technique and direct examination of stool samples were used to taeniosis diagnosis, and ELISA are used as screening test to cysticercosis, positives cases were confirmed with immunoblot. We found five positives cases to Taenia sp. eggs, which represents a 1.4 percent (95 percentCI: 0.2 - 2.5 percent) of a taeniosis prevalence, being individuals between the 20 to 49 years those which presented high proportion. We found 3.3 percent (95 percentCI: 1.5 - 5.1 percent) of cysticercosis prevalence for 12 positives cases, being most frequent in women. No association with evaluated factors was found. Though the prevalence is low, the existence of the taeniosis and cysticercosis is confirmed in this population, by what there is suggested the establishment of prevention and control strategies, emphatically in the community education.

Evaluación de una prueba de ELISA con antígeno metabólico de Fasciola hepatica para el diagnóstico de fasciolosis humana en Cajamarca, Perú / Evaluation of an ELISA test with Fasciola hepatica metabolic antigen for diagnosis of human fascioliasis in Cajamarca, Peru

Se obtuvo el antígeno metabólico (antígeno excreción - secreción) de Fasciola hepatica de ovinos infectados de Cajamarca, con una concentración proteica de 1 005 μg/μL, compuesta principalmente por proteνnas de peso molecular entre 1,2 y 170 KDa. Se detectaron bandas de 170; 150; 31; 24; 18-14 y 10 kDa. Con este antνgeno se desarrollσ una prueba de ELISA y se determinσ su punto de corte en 0,140. Se evaluσ 33 sueros de pacientes con fasciolosis confirmada por visualización de huevos en heces, 177 sueros de pacientes sin fasciolosis provenientes de áreas endémicas de Cajamarca y 88 sueros de pacientes con otras infecciones parasitarias y bacterianas. Se encontró una sensibilidad de 97,0 por ciento, especificidad de 96,6 por ciento, valor predictivo positivo de 78,1 por ciento y valor predictivo negativo de 99,6 por ciento. Se encontró reacción cruzada en 9/88 sueros evaluados. Se recomienda la implementación y uso de esta prueba para el diagnóstico de fasciolosis.

Metabolic (excretion/secretion) antigen was obtained from sheep infected with Fasciola hepatica, with a 1005 μg/μL of protein concentration, composed principally by proteins of molecular weight between 1.2 and 170 KDa. Bands of 170, 150, 31, 24, 18-14 and 10 kDa were detected. With this antigen an ELISA test was developed and the cut off was determined in 0.140. We evaluated 33 serums of patient with fascioliasis confirmed by visualization of eggs in feces, 177 serums of persons without fascioliasis from endemic rural areas of Cajamarca and 88 serums of patients with others parasitic and bacterial infections. We found a 97.0 percent of sensitivity, 96.6 specificity, 78.1 percent predictive positive value, 99.6 percent predictive negative value. In 9/88 serums was found cross reactions. We recommended the implementation and use of this test for the fascioliasis diagnosis.

Diagnóstico de la toxocarosis humana / Diagnosis of human toxocarosis

La toxocarosis humana es una importante zoonosis parasitaria causada por formas larvarias de especies del género Toxocara, un parásito nematodo de los perros y los gatos. La migración de la larva por los diferentes tejidos blandos en el ser humano genera una serie de entidades clínicas en el paciente, tales como el síndrome de larva migrans visceral, la toxocarosis ocular y la neurotoxocarosis. El diagnóstico definitivo es mediante la histopatología en biopsias, pero resulta ser casi imposible de realizar y actualmente su diagnóstico se establece mediante el análisis de la sintomatología clínica, los antecedentes epidemiológicos del paciente y el uso de pruebas hematológicas e inmunológicas de laboratorio que son las que finalmente ayudan a confirmar la sospecha clínica de la enfermedad. El propósito del presente artículo es actualizar los conocimientos que se tienen sobre el uso de las diferentes herramientas para establecer el diagnóstico y el monitoreo de la toxocarosis humana.

Human toxocarosis is an important parasitic zoonosis caused by larval stages of Toxocara species, the roundworms from dogs and cats. Larval migration through different soft tissues in the human generates several clinical entities in the patient, such as visceral larva migrans, ocular toxocarosis, and neurotoxocarosis. Definitive diagnosis by histopathological methods is very difficult or almost impossible and, nowadays, the diagnosis is usually made by clinical signs/symptoms, epidemiological background of the patient and the use of hematological and immunological tests which finally help to confirm the clinical suspicion of the illness. The purpose of this paper was to update the available knowledge on the use of different tools for both the diagnosis and following up of human toxocarosis.